Sequence Analysis of Malaysian Infectious Bursal Disease Virus Isolate and the Use of Reverse Transcriptase Nested Polymerase Chain Reaction Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for the Detection of VP2 Hypervariable Region

Publication Type:Journal Article
Year of Publication:2003
Authors:Phong, SF, Hair-Bejo, M, Omar, AR, Aini, I
Journal:Avian Diseases
Volume:47
Issue:1
Date Published:2003
ISBN Number:00052086
Keywords:Fringillidae, Serinus, Serinus serinus
Abstract:The VP2 hypervariable region of P97/302 local infectious bursal disease virus (IBDV) isolate was amplified by the reverse transcriptase (RT) nested polymerase chain reaction (PCR) and cloned. This region of P97/302 local isolate was sequenced and compared with eight other reported IBDV sequences. The result showed that P97/302 IBDV was most identical to the reported very virulent IBDV strains because it has amino acid substitutions at positions 222, 256, 294, and 299, which encode alanine, isoleucine, isoleucine, and serine, respectively. This region can be digested with restriction enzymes of Taq1, Sty1, Ssp1 but not with Sac1. The P97/302 isolate was then used for the optimization of RT nested PCR enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The RT nested PCR ELISA was able to detect 10-4 dilution of the infected bursa homogenates and was 10 times more sensitive when compared with the agarose gel detection method. The RT nested PCR ELISA can detect up to 0.48 ng of the PCR product. The specificity of this nested PCR ELISA was also high (100%). /// La secuencia de nucleótidos que codifica la región hipervariable de la proteína VP2 de una cepa local del virus de Gumboro, designada como P97/302, fue amplificada mediante la técnica de reacción en cadena por la polimerasa anidada con transcripción reversa. Esta región de la cepa P97/302 fue secuenciada y comparada con las secuencias de otros ocho aislamientos diferentes del virus de Gumboro. Los resultados indican que la cepa P97/302 es más cercanamente relacionada a cepas virulentas del virus de Gumboro debido a que presenta sustituciones de amino ácidos en las posiciones 222, 256, 294 y 299, las cuales codifican por alanina, isoleucina, isoleucina y serina, respectivamente. Esta región puede ser cortada con las enzimas de restricción TaqI, StyI, SspI pero no con SacI. El aislado P97/302 fue usado para optimizar una prueba de reacción en cadena por la polimerasa anidada con trascripción reversa asociado al ensayo de inmunoabsorción con enzimas asociadas (ELISA). Esta prueba fue capaz de detectar el genoma del virus en una dilución de 10-4 de una muestra de bolsa de Fabricio obtenida a partir de aves infectadas con el virus, siendo 10 veces más sensible que la detección por medio de electroforesis en gel de agarosa. La prueba de reacción en cadena por la polimerasa anidada con transcripción reversa asociado al inmunoensayo con enzimas asociadas puede detectar hasta 0.48 ng del ADN producto de la reacción. La especificidad de esta técnica también fue alta (100%).
URL:http://www.jstor.org/stable/1593217
Short Title:Avian Diseases
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