Molecular Characterization of Seven Field Isolates of Infectious Bursal Disease Virus Obtained from Commercial Broiler Chickens

Publication Type:Journal Article
Year of Publication:2001
Authors:Banda, A, Villegas, P, El-Attrache, J, Estevez, C
Journal:Avian Diseases
Volume:45
Issue:3
Date Published:2001
ISBN Number:00052086
Keywords:Fringillidae, Serinus, Serinus serinus
Abstract:Specific-pathogen-free sentinel birds were used as an initial biological system to isolate infectious bursal disease virus (IBDV) field isolates from commercial broiler farms exhibiting recurrent respiratory problems and poor performance. Reverse transcription (RT)-polymerase chain reaction (PCR) was used to amplify a 248-bp product encompassing the hypervariable region of the IBDV VP2 gene. Restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis of the RT-PCR products was performed with the restriction endonucleases DraI, SacI, TaqI, StyI, BstNI, and SspI. Two isolates (619 and 850) exhibited a RFLP pattern characteristic of Delaware variant E IBDV. Restriction enzyme digestion for four isolates (625, 849, 853, and 11153) revealed unmatched RFLP patterns when compared with reference IBDV strains. Nucleotide and deduced amino acid sequence analyses of the VP2 hypervariable region for these six isolates revealed identity (96.3% up to 98%) with Delaware E variant IBDV strain. However, serine at position 254, which is characteristic of Delaware variant strains, was substituted by asparagine in these six isolates. The seventh IBDV isolate (9109) also exhibited a unique RFLP pattern, which included the SspI restriction site, which is characteristic of very virulent (vv) IBDV strains. Nucleotide and amino acid sequence analyses of the hypervariable region for this isolate revealed identity (90%) with the standard challenge strain. However, the leucine residue at position 294 was substituted by isoleucine. This substitution corresponds to one of the amino acids that are conserved in the vvIBDV strains. Antigenic index studies of the predicted amino acid sequence of the hypervariable region of VP2 from isolates 619, 625, 849, 850, 853, and 11153 exhibited a profile almost identical to variant E, whereas the isolate 9109 exhibited a profile characteristic of standard IBDV strains. /// Se usaron aves centinelas libres de patógenos específicos como sistema de aislamiento inicial para aislar cepas de campo del virus de la enfermedad infecciosa de la bolsa a partir de granjas con problemas respiratorios recurrentes y baja productividad. Se utilizó la transcripción reversa y la reacción en cadena de la polimerasa (de las siglas en inglés RT-PCR) para amplificar productos de 248 pares de bases, abarcando la región hipervariable del gen VP2. Se realizó el análisis del polimorfismo en la longitud de fragmentos de restricción (de las siglas en inglés RFLP) de los productos obtenidos por RT-PCR utilizando las endonucleasas de restricción Dra I, Sac I, Taq I, Sty I, Bst NI, and Ssp I. Los aislamientos 619 y 850 mostraron patrones característicos de la cepa variante Delaware E. Los aislamientos 625, 849, 853 y 11153 mostraron un "tipo nuevo" de patrón RFLP. Por el análisis de las secuencias de nucleótidos y aminoácidos de la región hipervariable de VP2, estos seis aislamientos resultaron estar cercanamente relacionados con la cepa variante Delaware E (96.3% a 98%). Sin embargo, en estos aislamientos la serina en la posición 254, que es característica de las cepas variantes, fue sustituída por asparagina. El aislamiento 9109 también mostró un patrón único de RFLP que incluyó el sitio de restricción para Ssp I, característico de las cepas del virus de Gumboro de alta virulencia (de las siglas en inglés vvIBDV). Este aislamiento mostró similitud con la cepa estándar de desafio STC mediante el análisis de las secuencias de nucleótidos y aminoácidos. Sin embargo, el residuo de leucina localizado en la posición 294 fue sustituído por isoleucina. Esta sustitución concuerda con uno de los aminoácidos que estan conservados en las cepas vvIBDV. Los estudios del índice antigénico de la secuencia predicha de aminoácidos correspondiente a la región hipervariable del gen VP2 de los aislamientos 619, 625, 849, 850, 853 y 11153, mostraron un perfil casi idéntico a la variante E. El aislamiento 9109 mostró un perfil característico de las cepas estándar.
URL:http://www.jstor.org/stable/1592903
Short Title:Avian Diseases
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